Evaluating the expression of lncRNA MEG3, core 191, core 173 inhepatocellular carcinoma cell line / By Dina Mofed Ibrahim Abd El Raouf; Supervisors Salwa Farouk Sabet; Ahmed Abdel Aziz Bayoumi; Tamer Ibrahim Zaki Salem.

Thesis (Ph.D)-Cairo University,2022.

Bibliography: p. 132-169.

الدرجة : دكتوراة الفلسفة في العلوم . قسم علم الحيوان . شعبة ( بيولوجيا الخلية والانسجة والوراثة الاحماض النووية الريبية الطويلة غير مشفرة (IncRNAs) تلعب دورا مهما في تطوير وتقدم سرطان الكبد. كما ايضا تم اكتشاف قلة تعبير العديد من lncRNA المثبطة لأورام ، مثل MEG3 الذي يلعب دورا هاما في تثبيط نمو خلايا سرطان الكبد. تشير العديد من الدراسات أن هناك علاقة بين بروتين C173 و RNA MEG3 ، حيث وجد أن بروتين C173 يثبط التعبير عن IncRNA MEG3 بمسارات مختلفة. تجدر الإشارة إلى أن بروتين C173 ينظم مثبط الورم 152 miRNA ، وهذا يؤدي إلى زيادة التعبير لبروتين DNMT1 كما ان يلعب DNMT1 دورًا حيويًا في تثبيط IncRNA MEG3 عبر مثيلة محفز على النقيض من ذلك ، فإن (C191) يتشارك مع IncRNA MEG3 في تحريض موت الخلايا المبرمج وتثبيط نمو الخلايا السرطانية عبر إجهاد الشبكة الاندوبلازمية وزيادة التعبير عن البروتينات المرتبطة بالإجهاد للشبكة الاندوبلازمية مثل ( CHOP ATF ، PERK IRE 1 GRP78 و 3-caspase المشقوق). تهدف هذه الدراسة إلى تقييم تأثير C173 و C191 أثناء الإفراط في التعبير عن IncRNA MEG3 ، في خلايا HepG2 ، على الجينات المعروف أنها تنظم أثناء الإصابة بفيروس التهاب الكبد C و IncRNA MEG3. سيعطي هذا رؤى وفهم أفضل للعلاقة بين عدوى التهاب الكبد الفيروسي وتطور سرطان الكبد. يتم تنظيم الاحماض النووية الريبية الطويلة غير المشفرة ( lncRNA) في الخلايا السرطانية بما في ذلك IncRNA MEG3 ، والذي يتم تنظيمه في HCC. بالإضافة إلى ذلك ، من المعروف أن البروتينات الأساسية لـ HCV تؤدي إلى خلل في تنظيم المسارات الخلوية المهمة التي تؤدي إلى الإصابة بسرطان الخلايا الكبدية (HCC). هذه الدراسة تهدف الى تقييم الإفراط في التعبير عن (lncRNA MEG3 وتحديد القدرة العكسية للتعبير الزائد عن IncRNA MEG3 على خلايا HepG2 . وبالمثل ، تم تقييم تأثير الشكل غير الناضج (C191) والشكل الناضج (C173) من البروتين الأساسي HCV بمفرده أو بالاشتراك مع IncRNA MEG3 في خلايا HepG2 كنهج علاجي محتمل. ولذلك عدة من التجارب التي اجريت لاثبات هذه الاحتماليه ومنها تم تقييم صلاحية الخلية بواسطة مقايسة MTT بعد تعداء خلايا 2 بواسطة البلازميدات التالية: PCI-MEG3 و pN1-C191 و pN1-C173 و pEGFP-N1 و PCIAMEG3 و pCI-MEG3 + pN1 C191 و pCIMEG3 + pN1-C173. لوحظ مورفولوجيا الخلية باستخدام مجهر مقلوب. تم تقدير مستويات نسخ الجينات التي تم الإبلاغ عنها سابقًا أن لها تأثيرًا تنظيميًا على بروتين HCV الأساسي و p53) LncRNA MEG3 و DNMT1 و miRNA152 و TGF-b و 2-BCL) بواسطة qRT-PCR. تم تحديد مستويات التعبير عن 3-caspase و MKI67 بواسطة مقايسة الكيمياء الخلوية المناعية وتم تقدير النسبة المئوية لموت الخلايا عن طريق مقايسة موت الخلايا المبرمج وكشفت النتائج ان زيادة تعبير pCI-MEG3 + pN1-C191 ادى إلى زيادة ملحوظة في تراكم الخلايا الميتة وانخفاض في بقاء الخلية بنسبة %62.6 و 55.3% في 48 ساعة و 72 ساعة. بالإضافة إلى ذلك ، تم الكشف عن زيادة ملحوظة في التعبير عن الجينات المثبطة للورم (53) و miRNA152) وانخفاض ملحوظ في التعبير عن الجينات المسرطنة (DNMT1 و BCL2 و TGF-b). علاوة على ذلك ، أظهرت نتائج فحص موت الخلايا المبرمج زيادة معنوية في موت الخلايا المبرمج الكلي (المبكر والمتأخر ) . وأخيرًا ، كشفت نتائج الكيمياء الخلوية المناعية عن زيادة كبيرة في علامة موت الخلايا المبرمج 3-caspase وانخفاض في علامة الورم MKI67. كانت جميع النتائج أعلى فيما يتعلق بزيادة تعبير pCI-MEG3 + pN1-C191 مقارنة بزيادة تعبير -pCI MEG3 وحده أو pN1-C191 .وحده ونستنتج من ذلك ان C191 له تأثير تآزري مع IncRNA MEG3 في إحداث موت الخلايا المبرمج في خلايا HepG2. لذلك ، قد يكون للتعبير المشترك عن IncRNA MEG3 و C191 خصائص محتملة مضادة للسرطان