Thesis (M.Sc.) -Cairo University, 2023.

Bibliography: pages 66-67.

Cancer ranks as one of the leading causes of death worldwide and poses a significant obstacle to
extending life expectancy. Effective cancer therapy is a global concern. However, due to the complexity of
the disease, with its wide variety of cancer subtypes and molecular pathways, finding effective treatments
remains elusive. Despite surgical resection, radiotherapy, and chemotherapy have significantly reduced cancer
mortality, survival rate remains low due to tumor metastasis, drug resistance, and various adverse drug
reactions. Therefore, there is an urgent need for an alternative strategy to control this disease. Nature continues
to be a great source of new, inventive entities with therapeutic value owing to the vast structural diversity
found in them. Phytochemicals are secondary plant metabolites with antioxidant characteristics, have shown
chemopreventive impact in cancer by reducing DNA damage caused by oxidative stress. Additionally,
phytochemicals regulate various cellular and molecular actions including apoptosis, cell cycle regulation, cell
proliferation, metabolism, DNA repair, angiogenesis, metastasis, as well as the activation/inactivation of
oncogenes and tumor suppressor genes.
Despite their remarkable anticancer activity, phytochemicals are restricted due to their low aqueous
solubility, poor bioavailability, hepatic disposition, and poor cell penetration. To address these challenges,
various drug delivery platforms have been developed, and the production of nanocarriers has emerged as a
fascinating tool. Specifically, polymeric nanoparticles (PNPs) have been reported to offer effective delivery
of multiple natural bioactive agents, providing high entrapment capacity, stability, controlled release,
enhanced bioavailability, and remarkable therapeutic efficacy. Additionally, surface modification and polymer
functionalization have played a crucial role in enhancing the properties of PNPs, reducing their possible
toxicity, and enabling the development of targeted treatment therapies with improved efficacy.
The aim of this thesis was to enhance the intestinal permeability, cellular uptake, targeting, and
cytotoxicity against colon cancer cells of a nutraceutical cranberry powder extract (CBPE) by developing and
optimizing a promising CBPE-loaded PLGA nanoparticles (CBPE-PLGA NPs) as a potential delivery
platform. The double emulsion solvent evaporation technique was employed, and chitosan was used as a
surface modifier for the nanoparticles.
A full 23 factorial design was employed to investigate the influence of lactide/glycolide ratio, PLGA
weight, and stabilizer concentrations on entrapment efficiency percentage (EE%), particle size (PS),
polydispersity index (PDI), and zeta potential (ZP). Design-Expert® software was utilized to determine the
optimal formula in terms of achieving the highest EE% and smallest PS, while maintaining ZP and PDI values
within their ranges. The selected optimum formula was further subjected to additional in vitro characterization
using attenuated total reflection-fourier transform infrared (ATR-FTIR) and transmission electron microscopy
(TEM) to assess the efficiency of the surface modification.
Furthermore, an ex vivo non-everted rat intestinal sac model was employed to assess the enhancement
in intestinal permeability achieved by the optimized formulae. The cytotoxic activity of the optimized CBPE-
PLGA NPs was evaluated against HT-29 human colon cancer cell lines using caspase-3, vascular endothelial
growth factor (VEGF), and signal transducer and activator of transcription-3 (STAT-3) assays, compared to
the intestinal permeability and cytotoxic activity of the CBPE solution.
The optimal formula (F4) exhibited a maximum desirability value (D) of 0.775, achieving a
comparatively high EE% (72.30 ± 2.86%), spherical particles with an appropriate size (370.10 ± 10.31 nm),
PDI; (0.398 ± 0.001), and ZP of ( -5.40 ± 0.21 mV). ATR-FTIR results confirmed that the chitosan surface-
modified formula (CS-F4) showed a significant rise in particle size (417.67 ± 6.77 nm) and a shift of zeta
potential from negative to positive (+21.63 ± 2.46 mV), indicating the effective chitosan surface modification.
Permeability coefficient (P ) values for F4 and CS-F4 were 2.05×10-4 cm/min and 2.91×10-4
app
cm/min, respectively, compared to 9.36×10-5 cm/min for the CBPE solution. These values indicated a 2.19-
fold and 3.10-fold enhance in intestinal permeability, respectively, when compared to the CBPE solution.
Furthermore, CS-F4 demonstrated substantial evidence of stimulating the level expression of caspase-3
protein and significantly inhibiting VEGF and STAT-3 protein expression levels, verifying the superior
efficacy of CS-F4 for targeting HT-29 human colon cancer cells. Previous outcomes revealed that chitosan
surface modified PLGA NPs could potentially be considered as a promising delivery strategy for CBPE with
superior permeability, targeting, and cytotoxic efficacy.

هناك حاجة متزايدة لاستكشاف المكملات الغذائية كعوامل مضادة للسرطان للتغلب على قيود العلاجات التقليدية للسرطان. مستخلص مسحوق التوت البري (CBPE) هو مركب مكمل غذائي واعد حاز على اهتمام كبير مؤخراً بسبب قدرته البارزة على مكافحة السرطان. ومع ذلك، فان فعاليته العلاجيةمحدودة، نظرا لسرعة إزالته من البلازما و محدودية نفاذيتة من الأمعاء. تلعب الجسيمات النانوية البوليمرية (PNPs) دوراً حاسماً في التحكم والتوصيل المستهدف للمركبات الطبيعية الحيوية المضادة للسرطان. في هذه الدراسة، تم استخدام جسيمات نانوية بوليمرية معدلة سطحيًا لتعزيز توصيل CBPE وزيادة نفاذيتة من الأمعاء والامتصاص الخلوي والتوجيه والنشاط المضاد للسرطان. تتعلق الدراسة بتقييم تأثير نسبة اللاكتيد/الجلايكولايد، وكمية البوليمر المستخدم (PLGA)، وتركيزات المثبت(PVA) على نسبة الدواء المدمج داخل الجسيمات المحضرة (EE٪)، حجم الجسيمات (PS)، مؤشر التشتت لحجم الجسيمات (PDI)، والجهد الكهربائي (ZP).
أثبتت النتائج زيادة قيم كفاءة الاحتجاز لمستخلص مسحوق التوت البري داخل الجسيمات النانوية البوليمرية المحضرة بشكل مؤثر إحصائيا عندما انخفضت نسبة اللاكتيد/الجلايكولايد (L/G)، الأمر الذي يمكن أن يُنسب إلى درجة حرارة التحول الزجاجي (Tg) لبوليمر البيلجا PLGA)). علاوة على ذلك، زادت نسبة الاحتجاز لمستخلص مسحوق التوت البري بشكل كبير مع زيادة وزن بوليمر البيلجا و كذلك مع إدراج 1% وزن/حجم من المثبت الغير الأيوني(PVA) . من ناحية أخرى، أظهر حجم الجسيمات زيادة كبيرة مع زيادة نسبة اللاكتيد/الجلايكولايد (L/G) وكذلك وزن بوليمر البيلجا، وتركيز المثبت الغير الأيوني(PVA) . ومع ذلك، أظهر مؤشر معدل انتشار حجم الجسيمات (PDI) انخفاضًا كبيرًا عندما ازدادت نسبة اللاكتيد/الجلايكولايد، فضلاً عن زيادة وزن بوليمر البيلجا وتركيز المثبت الغير الأيوني(PVA) . كما أثبتت النتائج أن زيادة وزن بوليمر البيلجا ونسبة اللاكتيد/الجلايكولايد غير مؤثرين إحصائيا على الشحنة الكهربائية السطحية .(ZP) بالمقابل، زيادة تركيز المثبت الغير الأيوني (PVA) أدت إلى انخفاض مؤثر إحصائيا في قيم الشحنة الكهربائية السطحية.
تم استخدام بوليمر الكايتوزان في التعديل السطحي للجسيمات النانوية البوليمرية المحضرة CS-CBPE-PLGA NPs (F4) مما أدى إلى زيادة ملحوظة إحصائيا في حجم الجسيمات وكذلك تحول الشحنة الكهربائية السطحية من السالبة إلى الموجبة ، مما يؤكد فعالية تعديل السطح باستخدام بوليمر الكايتوزان. اختصارا، يعزز دمج CBPE في الجسيمات النانوية البوليمرية المحضرة بإستخدام بوليمر البيلجا (PLGA) والمُعدَّلة سطحيًا بإستخدام الكيتوزان (chitosan) من امتصاصه الخلوي وكذلك كفاءة الاستهداف الخلوي، مما يؤدي في النهاية إلى زيادة كبيرة في فعاليته المضادة للسرطان.

Issued also as CD

Text in English and abstract in Arabic & English.