A Study on the Potential Effects of Platelet Rich Plasma and Praziquantel Separately and Combined on Liver Fibrosis in Schistosoma mansoni Experimentally Infected Mice / By Angham Mohamed Ahmed Bayoumi; Supervised by Prof. Dr. Mousa Abdel Gawad Mousa Ismail, Prof. Dr. Soheir Sayed Mohammed Mahmoud, Assistant Prof. Dr. Hebat-Allah Salah Ahmad Yousof, Dr. Ahmed Soliman Ahmed Soliman.

Thesis (Ph.D)-Cairo University, 2023.

Bibliography: pages 90-108.

The present study was designed to evaluate the potential therapeutic effect of PRP alone and in combination with PZQ on S. mansoni induced liver fibrosis in experimentally infected mice.
The study was conducted on 162 male swiss albino mice aging 6-8 weeks and about 20-30 gm in weight. The mice were divided into the following groups: non-infected group (66 mice) and infected group (96 mice). The non-infected group was further subdivided into 6 subgroups: non-infected non-treated group (6 mice), non-infected mice treated with PRP (IP), PRP (IH), PZQ, PZQ+PRP (IP) and PZQ+PRP (IH) (12 mice each). The infected group was further subdivided into 8 subgroups: infected non-treated group, infected treated with PRP (IP), PRP (IH) 6th W, PRP (IH) 10th W, PZQ, PZQ+PRP (IP), PZQ+PRP (IH) 6th W and PZQ+PRP (IH) 10th W (12 mice each).
Ten male albino rats weighing about 300 gm were used for preparation of PRP.
Mice were infected by SC injection with (60±10) cercaria suspended in 0.2 ml solution.
PZQ was given orally in a dose of 500 mg/kg for 2 consecutive days at the end of the 6th week PI. PRP (IP) was given in a dose of 500 μl/kg (1:1 in PBS) twice/week from the 6th week PI for 3 weeks. PRP (IH) was given in a dose of 100 μl at the end of the 6th week PI in groups (A3, B3 and B7) and at the end of the 10th week PI in groups (B4 and B8).
To detect early and late effects of treatments, half the number of mice from all groups was euthanized at the end of 12th week PI and the other half was euthanized at the end of 14th week PI.
livers sections collected from every group of mice were fixed in10% formalin. Then, paraffin fixed blocks were prepared and sectioned at a thickness of 4 μm. Sections
Summary
88
were stained with H&E to explore the hepatic morphological alterations and Masson’s trichrome to evaluate hepatic fibrosis and viewed under microscope at low power of magnification (x10).
Parasitological examination was done by counting the mean number of granulomas, the mean diameter of granuloma and the fibrotic index. In addition to histopathological examination of liver sections. IHC examination was done for TGF-β1.
Early parasitological and histopathological assessments of the mean granuloma number showed significant reduction in infected groups treated with PZQ+PRP (IH) 10th W, PRP (IP), PZQ+PRP (IP) and PZQ+PRP (IH) 6th W: 33.33%, 33%, 27.77% and 27.22%, respectively. Furthermore, assessment of the mean granuloma diameter showed significant reduction in infected groups treated with PRP (IH) 10th W and PZQ+PRP (IP): 24.17% and 15.5%, respectively. Moreover, assessment of the fibrotic index showed significant reduction in infected groups treated with PZQ+PRP (IP), PRP (IP) and PZQ+PRP (IH) 6th W: 48.18%, 46.81% and 41.36%, respectively.
Early TGF-β1 (IHC) findings were in correlation with parasitological and histopathological results, the groups received, PZQ+PRP (IP), PZQ+PRP (IH) 6th W and PRP (IP) showed the most reduction in TGF-β1 expression: 88.63%, 88.63% and 77.27%, respectively.
Late parasitological and histopathological assessments showed significant reduction in mean granuloma number in infected group treated with PZQ: 40.24%. Moreover, PZQ regimen induced the greatest reduction in TGF-β1 expression on IHC study (83.33%), followed by PRP (IH) 10th W (66.66%), then PRP (IP) (33.33%).
All results of the above-mentioned treated groups were statistically significant compared to the infected non-treated group.
Combined PRP and PZQ treatment expressed marked improvement of fibrosis compared to using each of PRP and PZQ treatment separately. But, PRP(IH) alone demonstrated increasing in the number of the mean hepatic granulomas and the mean granuloma diameter. Late effects of PZQ, PRP(IH)10th W and PRP(IP) revealed improvement in TGF-β1 expression by IHC. To better understand PRP's function in S. mansoni-induced liver fibrosis, more research is required.

تم تصميم الدراسة الحالية لتقييم التأثير العلاجي المحتمل للبلازما الغنية بالصفائح وحدها وبالاشتراك مع البرازيكوانتيل على التليف الكبدي الناجم عن البلهارسيا المانسونية في الفئران المصابة تجريبيا.
أجريت الدراسة على ١٦٢ من ذكور الفئران السويسرية البيضاء التي تتراوح أعمارها بين ٦-٨ أسابيع وحوالي ٢٠-٣٠جم في الوزن.
تم تقسيم الفئران إلى المجموعات التالية: المجموعة غير المصابة (٦٦فأر) والمجموعة المصابة (٩٦فأر).
تم تقسيم المجموعة غير المصابة إلي ست مجموعات فرعية: المجموعة غير المصابة غير المعالجة (٦فئران)، الفئران غير المصابة المعالجة بالبلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني، البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي، البرازيكوانتيل، البرازيكوانتيل +البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني والبرازيكوانتيل + البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي (١٢فأرا لكل منهم).
تم تقسيم المجموعة المصابة أيضا إلى ثماني مجموعات فرعية: المجموعة المصابة غير المعالجة , المصابة المعالجة بالبلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني , البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع السادس بعد العدوى , البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع العاشر بعد العدوى , البرازيكوانتيل , البرازيكوانتيل +البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني , البرازيكوانتيل + البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع السادس بعد العدوى و البرازيكوانتيل + البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع العاشر بعد العدوى (١٢فأرا لكل منهم).
تم استخدام ١٠ ذكور من الفئران البيضاء تزن حوالي ٣٠٠ جرام لإعداد البلازما الغنية بالصفائح.
أصيبت الفئران عن طريق الحقن تحت الجلد ب ٦٠±١٠ سيركاريا معلقة في محلول ٢. مل.
أعطيت الفئران البرازيكوانتيل عن طريق الفم بجرعة ٥٠٠ ملغ/كجم لمدة يومين متتاليين في نهاية الأسبوع السادس بعد العدوى وتم إعطاء البلازما الغنية بالصفائح بجرعة ٥٠٠ ميكرولتر/كجم (١:١في محلول ملحي الفوسفات) مرتين في الأسبوع من الأسبوع السادس بعد العدوى ولمدة ثلاثة أسابيع.
تم إعطاء البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي بجرعة ١٠٠ ميكرولتر في نهاية الأسبوع السادس بعد العدوى في المجموعات أ٣ , ب ٣ وب ٧ وفي نهاية الأسبوع العاشر في المجموعات ب٤ وب ٨
للكشف عن الأثار المبكرة والمتأخرة للعلاج، تم القتل الرحيم لنصف عدد الفئران من جميع المجموعات في نهاية الأسبوع الثاني عشر بعد العدوى والنصف الأخر تم القتل الرحيم في نهاية الأسبوع الرابع عشر بعد العدوي.
تم تثبيت أقسام الكبد التي تم جمعها من كل مجموعة من الفئران في١٠٪ فورمالين. بعد ذلك، تم تحضير كتل البرافين الثابتة وتقسيمها بسمك ٤ ميكرومتر. تم تلوين المقاطع بالهيماتوكسيلين لاستكشاف التغيرات المورفولوجية الكبدية وثلاثية الألوان لماسون لتقييم التليف الكبدي وعرضها تحت المجهر بقوة تكبير منخفضة (×١٠).
تم إجراء الفحص الطفيلي عن طريق حساب متوسط عدد الأورام الحبيبية ومتوسط قطر الورم الحبيبي والمؤشر الليفي. بالإضافة إلى الفحص النسيجي المرضي لعينات الكبد وتم إجراء الكيمياء الهستولوجية المناعية لعامل النمو التحولي.
أظهرت التقييمات الطفيلية والنسيجية المرضية المبكرة لمتوسط عدد الورم الحبيبي انخفاضا كبيرا في المجموعات المصابة التي عولجت بالبرازيكوانتيل+البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع العاشر بعد العدوى، البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني، البرازيكوانتيل+البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني والبرازيكوانتيل+ البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع السادس بعد العدوى: ٣٣.٣٣%, ٣٣%, ٢٧.٧٧%، ٢٧.٢٢% على التوالي.
علاوة على ذلك، أظهر تقييم مستوي قطر الورم الحبيبي انخفاضا كبيرا في المجموعات التي عولجت بالبلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع العاشر بعد العدوى والبرازيكوانتيل+البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني: ٢٤.١٧% و١٥.٥% على التوالي.
علاوة على ذلك، أظهر تقييم المؤشر الليفي انخفاضا كبيرا في المجموعات المصابة التي عولجت بالبرازيكوانتيل+البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني، البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني والبرازيكوانتيل+ البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع السادس بعد العدوى: ٤٨.١٨%, ٤٦.٨١%و٤١.٣٦% على التوالي.
كانت نتائج الكيمياء الهستولوجية المناعية لعامل النمو التحولي المبكرة مرتبطة بالنتائج الطفيلية والنسيجية المرضية وأظهرت المجموعات المعالجة ب بالبرازيكوانتيل+البلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني، البرازيكوانتيل+ البلازما الغنية بالصفائح بالحقن الكبدي عند الأسبوع السادس بعد العدوى والبلازما الغنية بالصفائح بالحقن البريتوني أكبر انخفاض في تعبير عامل النمو التحولي:٨٨.٦٣ %,٨٨.٦٣ %و٧٧.٢٧% على التوالي.
أظهرت التقييمات الطفيلية المتأخرة والتشريحية المرضية والكيميائية النسيجية المناعية انخفاضا كبيرا في متوسط عدد الورم الحبيبي وتعبير عامل النمو التحولي في المجموعات المصابة المعالجة بالبرازيكوانتيل: ٤٠.٢٤% و٨٣.٣٣% على التوالي.
كانت جميع نتائج المجموعات المعالجة المذكورة أعلاه ذات دلالة إحصائية مقارنة بالمجموعة المصابة غير المعالجة.
أظهر العلاج المشترك بالبلازما الغنية بالصفائح والبرازيكوانتيل تحسنا ملحوظا في التليف مقارنة باستخدام كلا من علاج البلازما الغنية بالصفائح والبرازيكوانتيل بشكل منفصل. لكن البلازما الغنية بالصفائح عن طريق الحقن الكبدي وحده أظهر زيادة في عدد الأورام الحبيبية الكبدية المتوسطة ومتوسط قطر الورم الحبيبي. الآثار المتأخرة للبلازما الغنية بالصفائح وحدها وبالإشتراك مع البرازيكوانتيل لم تكشف عن تحسن في التليف الكبدي. لفهم وظيفة البلازما الغنية بالصفائح بشكل أفضل في تليف الكبد الناجم عن الإصابة بالبلهارسيا المانسونية هناك حاجة إلى مزيد من البحث.

Issued also as CD

Text in English and abstract in Arabic & English.