Thesis (Ph.D)-Cairo University, 2024.

Bibliography: pages 36-69.

Newcastle disease is endemic in Egypt and oil-based inactivated vaccines are the commonly used control strategy for such devastating disease. One of the major limitations of these inactivated vaccines is the long time taken to develop sufficient and early protection, which rendered their continuous development, is a must. TLR agonists have shown to be promising vaccine adjuvants that can trigger early innate immunity through induction of pro-inflammatory cytokines and maturation of antigen presenting cells. Recently, there is a consensus on combining different adjuvants in a vaccine formulation to get the ideal adjuvant-antigen mixture attaining safe, early and sufficient immunity. Lipopolysaccharide, TLR4 agonist, hastens dendritic cells activation which in turn elicits efficient T cell response and cytokines production. The present study was conducted to develop an inactivated NDV vaccine formula combining Montanoide™ ISA 71 adjuvant with Lipopolysaccharide and evaluate its efficacy compared with NDV vaccine formula using Montanoide™ ISA 71 alone through vaccination of 21-day old SPF chicks. Potency of the prepared vaccines was conducted using HI and challenge tests. Results exhibited the efficacy of both formulated vaccines, in case of protection against challenge with velogenic NDV; the group received both adjuvant mixture with NDV antigen showed 100% protection with no mortality or morbidity appeared during the 15 observation days after challenge. While the group vaccinated with Montanoide™ ISA 71 alone with NDV antigen showed 90% protection. Likewise, the results of HI and lymphocyte proliferation tests confirmed earlier and statistically higher humoral and cell-mediated responses, respectively, which were seen in birds received the vaccine formula containing both adjuvants combination than that received Montanoide™ ISA 71 alone with NDV. Measuring TLR4, IFN-γ and IL-2 genes expression profile using qRT-PCR displayed the significant rise of such cytokines in peripheral blood mononuclear cells following vaccination with ND vaccine containing adjuvants mixture which was not seen in ND vaccine mixed with Montanoide™ ISA 71 only. Assessment of virus shedding following velogenic NDV challenge using qRT-PCR and infectivity titration on ECE revealed that the formulation of NDV with both adjuvants reduced NDV shedding titer significantly than that found in the commonly used Montanoide™ ISA 71 adjuvanted ND vaccine formula.

مرض النيوكاسل متوطن في مصر واللقاحات المثبطه الزيتيه هي استراتيجية المكافحة الشائعة الاستخدام لمثل هذا المرض المدمر. أحد التحديات الرئيسية لهذه اللقاحات المثبطه هو الوقت الطويل الذي يستغرقه تطوير الحماية الكافية والمبكرة ، مما يجعل تطويرها المستمر أمرا لا بد منه. أظهرت مواد TLR أنها مواد مساعدة واعدة للقاح و يمكن أن تؤدي إلى مناعة غير متخصصه مبكرة من خلال تحريض السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ونضج الخلايا المقدمه للانتجن. في الآونة الأخيرة ، هناك إجماع على الجمع بين المواد المساعدة المختلفة في تركيبة اللقاح للحصول على خليط مساعد مثالي يحقق مناعة آمنة ومبكرة وكافية. LPS عديد السكاريد الشحمي يسرع تنشيط خلايا DCsالتي بدورها تستحث استجابة فعالة لخلايا T-cell وإنتاج السيتوكينات. اجريت الدراسة الحالية لتطوير تركيبة لقاح نيوكاسل مثبط تجمع بين مونتانويد ISA 71 مع عديد السكاريد الدهني كمواد مساعده في اللقاح وتقييم فعاليته مقارنة بلقاح نيوكاسل مثبط باستخدام المونتانايد ISA 71 وحده من خلال تطعيم الطيور خاليه من مسببات الامراض عمرها 21 يوما. تم إجراء فعالية اللقاحات المحضرة باستخدام اختبار تثبيط التلزن الدموي واختبارات التحدي. أظهرت النتائج فعاليه كلا اللقاحين في الحمايه ضد التحدي بالنيوكاسل الضاري. و قد اوضحت نتائج اختبار الحمايه ان المجموعة التي تلقت كلا من الخليط المساعد مع انتجن النيوكاسل أظهرت حماية بنسبة ۱٠٠⁒ مع عدم وجود وفيات أو شكل مرضي اثناء خمسه عشر يوما من الملاحظه وذلك بعد اجراء اختبار التحدي. بينما أظهرت المجموعة التي تم تطعيمها باستخدام المونتانايد ISA 71 وحده مع انتجن النيوكاسل حماية بنسبة ٩٠⁒. وبالمثل ، أكدت نتائج اختبارات انتشار الخلايا الليمفاوية و اختبار تثبيط التلزن
الدموي في وقت اسرع وأعلى إحصائيا في استجابه الاجسام المناعيه وكذلك الخلويه، على التوالي ، والتي شوهدت في الطيور التي تلقت تركيبة اللقاح التي تحتوي على كلا من خليط المواد المساعدة من تلك التي تلقت المونتانايد ISA 71 وحده مع انتجن النيوكاسل.كما اظهر قياس ملف تعريف التعبير الجيني ل TLR4 و انترفيرون جاما و IL-2 باستخدام اختبار تفاعل البلمره المتسلسل الكمي ارتفاعا كبيرا في هذه السيتوكينات في خلايا الدم بعد التطعيم بلقاح النيوكاسل الذي يحتوي على خليط المواد المساعدة والذي لم يتم تسجيله في لقاح النيوكاسل الممزوج بمونتانايد ISA 71 فقط.
وكذلك كشف تقييم انتشار الفيروس بعد اجراء اختبار التحدي تفاعل البلمره المتسلسل الكمي ومعايرة العدوى على بيض خالي من مسببات الامراض أن تركيبة انتجن النيوكاسل مع كلا المادتين المساعدتين قللت من انتشار الفيروس بشكل ملحوظ مقارنه بتلك الموجودة في تركيبة لقاح المونتانايد ISA 71 المساعد المستخدمه حاليا

Issues also as CD.

Text in English and abstract in Arabic & English.