Microbial production of vitamin B12 from agro-industrial wastes /
Rania Mohammed Mahmoud Abdel-Baki,
Microbial production of vitamin B12 from agro-industrial wastes / الإنتاج الميكروبى لفيتامين B12 من مخلفات التصنيع الزراعى / by Rania Mohammed Mahmoud Abdel-Baki ; Supervisors Dr. Galal Mahmoud El-sayed Khalafallah, Dr. Olfat Sayed Mahmoud Barakat. - 122 pages : illustrations ; 25 cm. + CD.
Thesis (Ph.D)-Cairo University, 2024.
Bibliography: pages 107-122.
Vitamin B12 is a very important water-soluble vitamin, which was first isolated from liver as an anti-pernicious anemia factor. The sole source of vitamin B12 is the animal-based food. It has a complicated structure and requires expensive multi-steps to be synthesized chemically. Intriguingly, vitamin B12 can be produced through microbial fermentation by microorganisms with more affordable price and more effective. This study aims to isolate and characterize microorganisms that have the capability to produce vitamin B12. As well as, optimize the vitamin B12 production conditions by isolated strains using suitable waste materials (molasses) to obtain the high vitamin B12 yield. Different bacterial and yeast isolates were isolated from marine and food samples. These isolates were screened for vitamin B12 production using B12 assay medium as a specific growth medium that lacks vitamin B12 and Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 as a test indicator organism. The content of vitamin B12 was estimated using spectrophotometer measurement and High-performance liquid chromatography (HPLC). The isolates that showed high vitamin B12 productivity were identified using MALDI-TOF technique. The identified strains were implemented for the optimization of vitamin B12 production to reveal the most proper and optimum conditions for production in two methods; One-Factor-At-A-Time (OFAT) followed by Response surface methodology (RSM). RSM was employed to enhance the production of vitamin B12 by Design Expert Software. Molasses was used for vitamin B12 production using the most optimum conditions as determined by RSM results. Eighty-seven actinomycetes, bacterial, and yeast isolates were screened for vitamin B12 production. Sixteen isolates showed high vitamin B12 productivity. The highly productive bacterial and yeast isolates were identified using the MALDI- TOF analysis. The isolates were identified as Candida pelliculosa (3 strains), Geotrichum candidum ((3 strains), Bacillus subtilis (4 strains) and Bacillus sp. (2 strains). Bacillus sp. was identified using 16S rRNA sequencing as Peribacillus acanthi (MZ01). The effects of sugar type and inoculum size on the yield of vitamin B12 production were studied by some strains. Strains MZ05 and MZ01 were selected for the statistical RSM modeling using Box-Behnken design and Placket-Burman design respectively to optimize seven factors for the vitamin B12 production. These factors included temperature, fermentation time, salt concentration, pH, sugar concentration, inoculum size and aeration. Four factors, i.e. temperature, pH, sugar concentration, and inoculum size were shown to significantly improve the vitamin B12 production. A maximum yield of 64.21 µg/100 ml was obtained using the optimized RSM conditions. These optimized conditions were applied to produce vitamin B12 using molasses as a raw material for microbial growth. فيتامين ب 12 هو فيتامين هام للغاية قابل للذوبان في الماء وله أهمية كبيرة للإنسان، وقد تم عزله لأول مرة من الكبد. المصدر الوحيد لفيتامين ب12 هى الأطعمة ذات المصدر الحيوانى. هذا الفيتامين له تركيب معقد ويتطلب خطوات متعددة باهظة الثمن ليتم تصنيعه كيميائيًا و يمكن إنتاج فيتامين ب 12 من خلال التخمر الميكروبي بواسطة الكائنات الحية الدقيقة بسعر مناسب و فاعلية كبيرة. وتهدف هذه الدراسة إلى عزل وتوصيف الكائنات الحية الدقيقة التي لديها القدرة على إنتاج فيتامين ب12. بالإضافة إلى ذلك تحسين ظروف إنتاج فيتامين ب12 عن طريق السلالات المعزولة باستخدام مخلفات التصنيع الزراعى (المولاس) للحصول على إنتاجية عالية من الفيتامين. وقد تم الحصول على عزلات بكتيرية وخميرة مختلفة من عينات المياه والأغذية و تم اختبار قدرة هذه العزلات لإنتاج فيتامين ب12 باستخدام بيئة B12 assay medium كوسط نمو محدد يفتقر إلى فيتامين ب12 وبكتيريا Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 ككائن حى يدل على وجود الفيتامين. تم تقدير محتوى الفيتامين باستخدام قياس الطيف الضوئي والكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). تم تعريف العزلات التي أظهرت إنتاجية عالية لفيتامين ب12 باستخدام تقنية MALDI-TOF. ولتعظيم إنتاج فيتامين ب 12 بالسلالات المنتقاه وتحديد الظروف المثلى للإنتاج العالى تم دراسة تأثيرعامل واحد فى وقت واحد(OFAT) ثم استخدام منهجية سطح الاستجابة (RSM). تم استخدام RSM لتعزيز إنتاج فيتامين ب 12 بواسطة Design Expert Software. تم استخدام المولاس لإنتاج فيتامين ب 12 باستخدام أفضل الظروف على النحو الذي حددته نتائج RSM. تم فحص 87 عزلة من الأكتينوميستات والبكتيريا والخميرة لإنتاج فيتامين ب12. أظهرت 16 عزلة إنتاجية عالية من فيتامين ب12. تم تعريف عزلات البكتيريا والخميرة عالية الإنتاجية باستخدام تحليل MALDI-TOF على أنها ثلاثة سلالات من Candida pelliculosa وثلاثة سلالات من Geotrichum candidum ، وأربعة سلالات من Bacillus subtilis وسلالتين من Bacillus sp. وقد تم تعريف سلالة Bacillus sp بواسطة تكنيك 16S rRNA sequencing على أنها Peribacillus acanthi . ثم تم دراسة تأثير نوع السكر وحجم اللقاح على إنتاج فيتامين B12 بواسطة بعض السلالات. واختيار سلالتى Geotrichum candidum (MZ05) و Peribacillus acanthi (MZ01) لتطبيق النماذج الإحصائية (RSM) باستخدام التصميم Box-Behnken والتصميم Plackett-Burman على التوالى لدراسة تأثير سبعة عوامل لإنتاج فيتامين B12. وشملت هذه العوامل درجة الحرارة، ووقت التخمير، وتركيز الملح، ودرجة الحموضة، وتركيز السكر، وحجم اللقاح، والتهوية. وقد تبين أن درجة الحرارة ودرجة الحموضة وتركيز السكر وحجم اللقاح هى العوامل المؤثرة على تحسين إنتاج فيتامين ب 12 بشكل ملحوظ. وكان أقصى عائد تم الحصول عليه قدره 64.21 ميكروغرام/100 مل باستخدام ظروف RSM المحسنة بواسطة سلالة MZ05. ثم
Text in English and abstract in Arabic & English.
Agriculture and Technologies
Vitamin B12 Cyanocobalamin Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 Molasses
630
Microbial production of vitamin B12 from agro-industrial wastes / الإنتاج الميكروبى لفيتامين B12 من مخلفات التصنيع الزراعى / by Rania Mohammed Mahmoud Abdel-Baki ; Supervisors Dr. Galal Mahmoud El-sayed Khalafallah, Dr. Olfat Sayed Mahmoud Barakat. - 122 pages : illustrations ; 25 cm. + CD.
Thesis (Ph.D)-Cairo University, 2024.
Bibliography: pages 107-122.
Vitamin B12 is a very important water-soluble vitamin, which was first isolated from liver as an anti-pernicious anemia factor. The sole source of vitamin B12 is the animal-based food. It has a complicated structure and requires expensive multi-steps to be synthesized chemically. Intriguingly, vitamin B12 can be produced through microbial fermentation by microorganisms with more affordable price and more effective. This study aims to isolate and characterize microorganisms that have the capability to produce vitamin B12. As well as, optimize the vitamin B12 production conditions by isolated strains using suitable waste materials (molasses) to obtain the high vitamin B12 yield. Different bacterial and yeast isolates were isolated from marine and food samples. These isolates were screened for vitamin B12 production using B12 assay medium as a specific growth medium that lacks vitamin B12 and Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 as a test indicator organism. The content of vitamin B12 was estimated using spectrophotometer measurement and High-performance liquid chromatography (HPLC). The isolates that showed high vitamin B12 productivity were identified using MALDI-TOF technique. The identified strains were implemented for the optimization of vitamin B12 production to reveal the most proper and optimum conditions for production in two methods; One-Factor-At-A-Time (OFAT) followed by Response surface methodology (RSM). RSM was employed to enhance the production of vitamin B12 by Design Expert Software. Molasses was used for vitamin B12 production using the most optimum conditions as determined by RSM results. Eighty-seven actinomycetes, bacterial, and yeast isolates were screened for vitamin B12 production. Sixteen isolates showed high vitamin B12 productivity. The highly productive bacterial and yeast isolates were identified using the MALDI- TOF analysis. The isolates were identified as Candida pelliculosa (3 strains), Geotrichum candidum ((3 strains), Bacillus subtilis (4 strains) and Bacillus sp. (2 strains). Bacillus sp. was identified using 16S rRNA sequencing as Peribacillus acanthi (MZ01). The effects of sugar type and inoculum size on the yield of vitamin B12 production were studied by some strains. Strains MZ05 and MZ01 were selected for the statistical RSM modeling using Box-Behnken design and Placket-Burman design respectively to optimize seven factors for the vitamin B12 production. These factors included temperature, fermentation time, salt concentration, pH, sugar concentration, inoculum size and aeration. Four factors, i.e. temperature, pH, sugar concentration, and inoculum size were shown to significantly improve the vitamin B12 production. A maximum yield of 64.21 µg/100 ml was obtained using the optimized RSM conditions. These optimized conditions were applied to produce vitamin B12 using molasses as a raw material for microbial growth. فيتامين ب 12 هو فيتامين هام للغاية قابل للذوبان في الماء وله أهمية كبيرة للإنسان، وقد تم عزله لأول مرة من الكبد. المصدر الوحيد لفيتامين ب12 هى الأطعمة ذات المصدر الحيوانى. هذا الفيتامين له تركيب معقد ويتطلب خطوات متعددة باهظة الثمن ليتم تصنيعه كيميائيًا و يمكن إنتاج فيتامين ب 12 من خلال التخمر الميكروبي بواسطة الكائنات الحية الدقيقة بسعر مناسب و فاعلية كبيرة. وتهدف هذه الدراسة إلى عزل وتوصيف الكائنات الحية الدقيقة التي لديها القدرة على إنتاج فيتامين ب12. بالإضافة إلى ذلك تحسين ظروف إنتاج فيتامين ب12 عن طريق السلالات المعزولة باستخدام مخلفات التصنيع الزراعى (المولاس) للحصول على إنتاجية عالية من الفيتامين. وقد تم الحصول على عزلات بكتيرية وخميرة مختلفة من عينات المياه والأغذية و تم اختبار قدرة هذه العزلات لإنتاج فيتامين ب12 باستخدام بيئة B12 assay medium كوسط نمو محدد يفتقر إلى فيتامين ب12 وبكتيريا Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 ككائن حى يدل على وجود الفيتامين. تم تقدير محتوى الفيتامين باستخدام قياس الطيف الضوئي والكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). تم تعريف العزلات التي أظهرت إنتاجية عالية لفيتامين ب12 باستخدام تقنية MALDI-TOF. ولتعظيم إنتاج فيتامين ب 12 بالسلالات المنتقاه وتحديد الظروف المثلى للإنتاج العالى تم دراسة تأثيرعامل واحد فى وقت واحد(OFAT) ثم استخدام منهجية سطح الاستجابة (RSM). تم استخدام RSM لتعزيز إنتاج فيتامين ب 12 بواسطة Design Expert Software. تم استخدام المولاس لإنتاج فيتامين ب 12 باستخدام أفضل الظروف على النحو الذي حددته نتائج RSM. تم فحص 87 عزلة من الأكتينوميستات والبكتيريا والخميرة لإنتاج فيتامين ب12. أظهرت 16 عزلة إنتاجية عالية من فيتامين ب12. تم تعريف عزلات البكتيريا والخميرة عالية الإنتاجية باستخدام تحليل MALDI-TOF على أنها ثلاثة سلالات من Candida pelliculosa وثلاثة سلالات من Geotrichum candidum ، وأربعة سلالات من Bacillus subtilis وسلالتين من Bacillus sp. وقد تم تعريف سلالة Bacillus sp بواسطة تكنيك 16S rRNA sequencing على أنها Peribacillus acanthi . ثم تم دراسة تأثير نوع السكر وحجم اللقاح على إنتاج فيتامين B12 بواسطة بعض السلالات. واختيار سلالتى Geotrichum candidum (MZ05) و Peribacillus acanthi (MZ01) لتطبيق النماذج الإحصائية (RSM) باستخدام التصميم Box-Behnken والتصميم Plackett-Burman على التوالى لدراسة تأثير سبعة عوامل لإنتاج فيتامين B12. وشملت هذه العوامل درجة الحرارة، ووقت التخمير، وتركيز الملح، ودرجة الحموضة، وتركيز السكر، وحجم اللقاح، والتهوية. وقد تبين أن درجة الحرارة ودرجة الحموضة وتركيز السكر وحجم اللقاح هى العوامل المؤثرة على تحسين إنتاج فيتامين ب 12 بشكل ملحوظ. وكان أقصى عائد تم الحصول عليه قدره 64.21 ميكروغرام/100 مل باستخدام ظروف RSM المحسنة بواسطة سلالة MZ05. ثم
Text in English and abstract in Arabic & English.
Agriculture and Technologies
Vitamin B12 Cyanocobalamin Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 Molasses
630