Thesis (M.Sc)-Cairo University, 2025.

Bibliography: pages 61-79.

Enterococcus faecalis is a troublesome nosocomial pathogen with resistance to most available antimicrobial agents. Antivirulence agents represent an unconventional treatment approach.
Here, we developed a transcription factor decoy (TFD)-loaded cationic liposomes (TLL) as an inhibitor of Fsr quorum-sensing system and its associated virulence traits in E. faecalis. In the current study, the consensus sequence of the FsrA binding site was found to be conserved among 651 E. faecalis annotated genomes. The TFD was synthesized, as 82 bp duplex containing the conserved binding sequence, and loaded onto cationic liposomes. The optimum loading capacity of the TLL, their mean particle size and zeta potential, were characterized. The developed TLL lacked any effect on E. faecalis growth and significantly inhibited the in vitro gelatinase and serine protease, proteolytic enzymes controlled by the Fsr system, in a concentration-dependent manner. This inhibition was accompanied by a significant decrease in the transcription levels of FsrA-regulated genes (fsrB, gelE, and sprE), in the presence of TLL. The developed TLL were safe as evidenced by the nonhemolytic effect on human RBCs and negligible cytotoxicity of human skin fibroblast cell line. Moreover, in the larvae infection model, TLL inhibited the mortality of Galleria mellonella larvae infected with E. faecalis.
In conclusion, the developed TLL offer a new safe strategy for combating E. faecalis infection through the inhibition of quorum-sensing-mediated virulence. This provides a platform for the development of similar agents to combat many other pathogens.

تُعَد بكتيريا faecalis Enterococcus من مسببات الأمراض المزعجة التي تنتقل عبر المستشفيات و تتصف بمقاومتها لمعظم مضادات الميكروبات المتاحة. تمثل مضادات الضراوة نهجًا غير تقليدي للعلاج.
تمكنا في هذه الدراسة من تطوير حويصلات دهنية موجبة الشحنة محملة بافخاخ لعامل النسخ كمثبط لنظام استشعار النصاب Fsr وسمات الضراوة المرتبطة به في بكتريا faecalis E.، حيث تم التأكد من تطابق موقع الإرتباط الخاص بعامل النسخ FsrA في عدد 651 سلالة من سلالات بكتيريا E. faecalis.
تم تصنيع افخاخ لعامل النسخ على شكل جزيء من الحمض النووي DNA المزدوج يتكون من 82 من النيوكليوتيدات، وتم تحميله على الحويصلات الدهنية موجبة الشحنة. كما تم تحديد سعة التحميل المثلى و متوسط القطر و جهد زيتا لجزيئات النانو المحملة بافخاخ لعامل النسخ.
وجد ان جزيئات النانو المحملة بافخاخ عامل النسخ لا تؤثر على نمو بكتيريا E. Faecalis. كما اظهرت النتائج المعملية أن الجزيئات المطورة تثبط بشكل ملحوظ و بطريقة تعتمد على التركيز كل من إنزيمي الجيلاتيناز والسيرين بروتياز، وهما إنزيمان محلّلان للبروتين يتحكم فيهما نظام Fsr. و قد كان هذا التثبيط مصحوبًا بانخفاض كبير في مستويات نسخ الجينات التي يتم تحفيز التعبير الجيني لها بواسطة عامل النسخ FsrA و هي fsrB و gelE و sprE.
تم ايضاً تحديد السُمية الخلوية لجزئيات النانو المُحملة بالافخاخ عن طريق تقييم تأثيرها على خلايا Human Skin Fibroblast و قدرتها على تحلل كريات الدم الحمراء. و أثبتت النتائج أن هذه الجزيئات آمنة؛ حيث لم تُظهر أي تأثير سام على خلايا Human Skin Fibroblast وتسببت في تحلل كمية ضئيلة غير مؤثرة من كريات الدم الحمراء. علاوة على ذلك، فان حقن جزيئات النانو المحملة بافخاخ عامل النسخ في يرقات Galleria mellonella المصابة بـبكتريا E. faecalis منع موت هذه اليرقات.
وفي الختام، تمثل جزيئات النانو المحملة بافخاخ لعامل النسخ المطورة استراتيجية آمنة و واعدة لمكافحة عدوى بكتريا E. faecalis من خلال تثبيط الضراوة التي يسببها استشعار النصاب. وهذا يوفر وسيلة لتطوير عوامل مماثلة لمكافحة العديد من مسببات الأمراض الأخرى.

Issues also as CD.

Text in English and abstract in Arabic & English.