TY  - BOOK
AU  - Shaimaa Mostafa Abulmagd Mostafa,
AU  - Hamdallah Hafez Zedan
TI  - Development and evaluation of immunogenicity of candidate recombinant diphtheria vaccine
U1  - 616.01 
PY  - 2022///
KW  - Microbiology
KW  - vaccine
N1  - Thesis (Ph.D)-Cairo University,2022; Bibliography: p. 154-119
N2  - يتجه عالم صناعة الدواء حاليا إلى الأدويه المصنعه من أصل بيولوجي بدلا من الأدويه المصنعه بطرق كيميائيه مما يبشر بعصر جديد من صناعة الدواء. ويدعم هذا التوجه إستحواذ كبرى شركات الأدوية العالمية على شركات التكنولوجيا الحيوية أو معامل الأبحاث. وبعد أن كان التوجه في البدايه الى إنتاج مستحضرات التكنولوجيا الحيوية هو إنتاج مستحضرات غير معدله وراثيا أصبح الوضع هو التوجه لإنتاج مستحضرات مهندسة وراثيا لإضافة خصائص جديدة لهذه المستحضرات، نجد أن تطبيق هذا المجال لا يزال يعاني من قيود شديدة في مصر ، وخاصة على المستوى الصناعي. حيث لا تزال شركات الأدوية والمؤسسات الصناعية المصرية المعنية بالمستحضرات البيولوجية تعتمد على استيراد مستحضرات التكنولوجيا الحيوية في شكل منتج نهائي أو في شكل مواد مسبقه الصنع لخلطها وتعبئتها محليا ، وفي أفضل الأحوال قد تعتمد بعض المنشآت الصناعية على طرق التصنيع المستوردة. لذلك هناك حاجة ملحة لتطوير ووضع نموذج كنواة لإستخدام التكنولوجيا الحيوية لإنتاج البروتينات ذات الأهمية الحيوية والاقتصادية في مصر.       من أجل الدخول في هذا العصر الجديد وإنشاء نظام لإنتاج هذه البروتينات المهندسة وراثيا ، تم تصميم هذه الدراسة كتجربه لامكانية إنتاج لقاح الدفتيريا كمثال نموذجي لبروتين ذو أهمية بيولوجية واقتصادية عالية. وتهدف هذه الدراسة إلى إنتاج سم الدفتيريا الكامل والجزء Bلبكتريا الخناق من بكتريا الإشريشيا كولاي و تقييم البروتينات المنقاه الجديدة والمعبر عنها لاستخدامها في النهاية كلقاح مقترح ضد بكتريا الخناق. في هذه الدراسة تم عمل الآتي: 1.انشاء سلالة ايشريشيا كولاي متحده وراثيا بجين توكسين الدفتريا الكامل والجزء Bلنفس الجين لبكتريا الخناق: حيث تم عزل جين سم الدفتيريا الكامل والجزء B لنفس الجين لبكتريا الخناق  وتحميلهما في ناقلات التعبير الجيني المناسبة. واتخذت خطوات بروتوكول  معاد الاتحادDNA بما في ذلك عزل الحمض النووي الجيني من الدفتيريا وتقيم كمية الحمض النووي الجيني باستخدام مقياس الطيف الضوئي (الإسبكتوفوتوميتر) وتصميم بريميرات خاصة بعزل وإكتشاف جين سم الدفتيريا الكامل والجزء B لنفس الجين لبكتريا الخناق  لاستخدامه في نسخ جين سم الدفتيريا الكامل والجزء B لنفس الجين معاد الاتحاد عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل ، ومن ثم تحميله في ناقل بلازميدي مناسب لسلالة بكتريا الإشريشيا كولاي. وتم اختبار البروتين الذي تم الحصول عليه من التعبير الجيني للجينات المحملة على البلازميد المهندسة وراثيا في المختبر باستخدام جهاز الفصل الكهربائي وتم تقييم الاستجابة المناعية للبروتين الناتج عن التعبير الجيني باستخدام (الإليزا). 2.تنقية البروتين المعبر عنه جينيا: تم تنقية البروتين المعبر عنه جينيا باستخدام الطريقه التقليديه بالترسيب بتركيزات مختلفه من كبريتات الامونيوم. 3.تقييم القدرة المناعية في نموذج حيواني: تم تقييم القدرة المناعية للبروتين في فئران تجارب BALB/c و مقارنتها بلقاح متاح تجاريا. 4.الإنتاج على نطاق تجريبي: تم تحديد الظروف المثلى لعملية التخمير و تقييم إنتاج ثلاث دفعات من البروتين وفقا لاختبارات مراقبة الجودة لمنظمة الصحة العالمية. و قد أظهرت نتائج هذه الدراسة ما يلي: 1.التحميل الناجح لجين سم الدفتيريا الكامل والجزء Bلنفس الجين لبكتريا الخناق على البلازميد pET29a+. وأظهرت نتائج تحليل تفاعل البلمرة المتسلسل لسلالات بكتريا الإشريشيا كولاي الحاملة للبلازميدات المهندسة وراثيا أنها إيجابية. 2.تمنقل البلازميد المهندسة وراثيا بنجاح إلى سلالة بكتريا الإشريشيا كولاي BL21 ، والحفاظ على سلامتها وتسلسل النوكليوتيدات الصحيح ، كما يتضح من نتائج الاختبارات باستخدام طريقة تحليل تفاعل البلمرة المتسلسل للبلازميدات المهندسة وراثيا المستخرجة من السلالتين السابقتين ، بالإضافة إلى تحليل تسلسل الحمض النووي للمنطقة التي تحتوي على الجينين من البلازميدات المهندسة المستخرجة من السلالتين السابقتين. 3.تمإنتاج بروتين سم الدفتيريا الكامل والجزء Bلنفس سم بكتريا الخناق بنجاح وبإنتاجية عالية نسبيا مقارنة ببروتينات الخلية الكلية لسلالات بكتريا الإشريشيا كولاي BL21المعدلة وراثيا بالبلازميدات المهندسة تحت أكواد pET29a+-dt و pET29a+-dtbوالتي تحمل جين سم الدفتريا الكامل والجزء Bعلي الترتيب كما يتضح من اختبارات إنتاج البروتينين من السلالتين السابقتين باستخدام طريقة التفريد الكهربائي. 4.إجراءتنقية ناجحة للبروتينين المنتجين لسلالات بكتريا الإشريشيا كولاي BL21المعدلة وراثيا بالبلازميدات المهندسة والتي تحمل جين سم الدفتريا الكامل والجزء Bمما يؤكد أن عملية الإنتاج سليمة وبنفس النشاط البروتيني. 5. وجد أن إنتاج الأجسام المضادة في الفئران كانت مماثلة لتلك التي تنتجها الفئران المعاملة بسم الدفتريا الطبيعي عندما تم حقن بروتينات rdt و rdtb المركزة والمنقاه في الفئران BALB/c وتم الكشف عن تركيز الأجسام المضادة.  وفقا لما سبق ، فقد أكدت هذه الدراسة علي إمكانية إجراء التعديل المطلوب على لقاح الدفتيريا التقليدي لصنع لقاح جديد معدل وراثيا. كما تمكنت هذه الدراسة من الحصول علي سلالتين معدلتين جينيا تصلح لإنتاج لقاح كامل للدفتيريا ولقاح مكون من والجزء Bلسم الدفتيريا ، وتم إجراء دراسة على هاتين السلالتين الجديدتين للوصول إلى ظروف إنتاج مثالية لتحقيق أعلى إنتاجية.; وأيضا وفي المستقبل مع مزيد من البحث والدراسة يمكن الوصول إلى إنتاجية أعلى وتطبيقها في مصر نظرا لأهميتها الاستراتيجية والاقتصادية العالية حيث يعد لقاح الدفتيريا من بين اللقاحات الإجبارية بأكثر من جرعة وفقا لتوصيات منظمة الصحة العالمية
UR  - http://172.23.153.220/th.pdf
ER  -