Advanced studieson neospora caninum in dairy farms /
دراسات متقدمة علي النيوسبورا كانينم في مزارع الحلاب
by Roqaya Mohamed Hafez ; Supervision Prof. Dr. Waheed Mohamed Ali Mousa, Prof. Dr.Sahar Zayed Abd-Elmaogoud, Dr.Tahany Salama Behour.
- 74 pages : illustrations ; 25 cm. + CD.
Thesis (M.Sc)-Cairo University, 2025.
Bibliography: pages 54-74.
Neospora caninum is the causative agent of neosporosis, a polysystemic parasite disease that is present all over the worldand is a major cause of abortion in dairy and beef cattle in many countries. This study aimedto rapid and accurate detection of Neospora caninum that circulate in Egyptian dairy cattle farms using specific and sensitive molecular techniques in addition to molecular characterization and phylogenetic analysis of detected parasite. So in this study, Chelex method was used for DNA extraction from 139 blood samples from dams and tissue samples from 25 aborted foeti in 5 dairy farms in Egypt. Np6 and Np21 primer pair was used in PCR to detect the Nc-5 gene of N. caninum DNA.Results exposed 47.5% overall prevalence of N. caninum infection in aborted cows and 64.0% in foeti. Two farms were PCR negative for infection and the others revealed 45.7%, 87.0% and 91.0% molecular prevalence. The common PCR positive foetal tissue was brain followed by heart, liver, stomach contents then lung. The histopathological lesions in PCR positive 5-months age foeti were microgliosis in the brain meninges and submeningially and myocarditis in heart tissue. In 7-months age foeti, multifocal necrosis, perivascular and pericellular edema with mononuclear cells infiltration, neurons degeneration were found in the brain. Heart muscle fibers showed hemorrhage and necrotic changes. Tissue cyst was observed in the heart of 5-months age foeti and the brain of 7-months foeti. Sequenced amplicons from aborted cows and foeti were 100% identical. This investigation, as far as we are aware,is the first to sequence N. caninum isolates from cattle hosts. The sequences were submittedto GenBank with theaccession numbers; OR939832.1 and PP708713.1. Multiple sequence alignmentsrevealed variation between the study isolates and other published isolates from different regions and hosts. Phylogeny revealed clustering of our sequences withsequences of isolates from South Korea, China, and Italy.The sequences weredistinct from sequencespreviously isolated from camels in Egypt. تعتبر النيوسبورا كانينم العامل المسبب لمرض النيوسبوروسيس، وهو مرض طفيلي يصيب اجهزة الجسم المختلفة و موجود في جميع أنحاء العالم وأحد الأسباب الرئيسية للإجهاض في الأبقار الحلاب والمنتجة للحم في العديد من البلدان. كان الهدف من هذه الدراسة هوالكشف السريع والدقيق عن طفيل النيوسبورا كانينم الموجود في بعض مزارع الألبان المصرية باستخدام تقنيات جزيئية محددة وحساسة، بالإضافة إلى التوصيف الجزيئي والتحليل الوراثي التطوري للطفيل الذي تم الكشف عنه. ولإتمام الدراسة تم استخلاص الحمض النووي باستخدام مركب ال chelex من 139 عينة دم من الأبقار و 25 عينة من أنسجة الاعضاء المختلفة للأجنة المجهضة في 5 مزارع ألبان في مصر.وبأستخدام بادئاتNp6 و Np21 في تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للكشف عن جين Nc-5 الخاص بالحمض النووي لطفيل النيوسبورا كانينم. أظهرت النتائج انتشار الإصابة بنسبة 47.5% في الأبقار المجهضة و بنسبة 64% في الأجنة. وايضا اظهرت النتائج ان مزرعتين كانت سلبية للمرض، بينما أظهرت المزارع الأخرى انتشارًا بنسبة 45.7% و87% و91%. وكان أعلى نسيج إيجابي باستخدامتفاعل البلمرة المتسلسلهونسيج المخ، متبوعًا بنسيج القلب، الكبد، محتوى المعدة ثم نسيج الرئة.وبالفحص الباثولوجي للعينات الإيجابية باستخدامتفاعل البلمرة المتسلسلبعمر 5 أشهر وجدالتهاب خلايا الغشاء السحائي الدماغي والتحت السحائي وكذلك التهاب حاد بخلايا عضلة القلب.وبفحص خلايا الاجنة ذات السبعة اشهر تبينتنخر متعدد البؤر،الوذمة المحيطة بالأوعية الدموية والخلايا ،.تسلل الخلايا أحادية النواة،وانتكاس الخلايا العصبية، وايضا لوحظ نزيف وتنخرفي عضلات القلب. وكذلك تم رصد التكيس النسيجي داخل انسجة القلب للجنين بعمر 5 أشهر و ايضا بنسيج مخ الجنين بعمر 7 أشهر.وأظهرت النتائج أن تسلسلات الحمض النووي للمعزولات من الأبقار المجهضة والأجنة متطابقة تمامًا.وتم تسجيل التسلسلات في قاعدة بيانات بنكالجينات تحت أرقام مرجعية OR939832.1 وPP708713.1. .على حد علمنا،تعتبر دراستنا هي الأولى في مصر التي قامت بكشف التسلسل النيوكليتيدي لمعزولات من الابقار للنيوسبورا كانينم .كما أظهرت مقارنة التسلسلات الجينية المتعددة وجود تنوع جيني بين المعزولات المدروسة والمعزولات المنشورة الأخرى من مناطق وحيوانات مختلفة. بينما كشف التحليل الوراثي التطوري عن قرب تسلسلاتنا مع تسلسلات تم عزلها من كوريا الجنوبية والصين وإيطاليا، مع اختلافها عن التسلسلات المعزولة سابقًا من الإبل في مصر.