TY - BOOK AU - Alaa Ashraf Mohammed El-hewehy, AU - Ahlam Mahmoud El-fishawy Prof. Dr. Prof. Dr. AU - Engy Mohsen Ahmed Sabry AU - Marwa Abdelaziz Fayed TI - A pharmacognostical study of Pithecellobium dulce (Roxb.) benth. family leguminosae cultivated in egypt U1 - 615.1 PY - 2025/// KW - Drugs KW - العقاقير KW - Leguminosae, P. dulce KW - Afzelin KW - fisetin 3-O-rhamnoside KW - alangilignoside D KW - UPLC-ESI–MS/MS KW - HPLC-DAD KW - cytotoxicity N1 - Thesis (M.Sc)-Cairo University, 2025; Bibliography: pages 150-182; Issues also as CD N2 - Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth (family Leguminosae) is widely consumed in several countries to treat various illnesses. P. dulce leaves represent a valuable source of biologically active phytoconstituents. The phytochemical screening of the leaves’ methanolic extract confirmed the presence of flavonoids, alkaloids, anthraquinones, terpenes, sterols, tannins, saponins, carbohydrates, and reducing sugars. The quantitative determination of the methanol extract showed total phenolics, flavonoids, and tannins of 51.44 ± 1.36 mg GAE/g extract, 49.48 ± 3.6 mg RE/g extract, and 145.5 ± 7.6 mg CE/g extract, respectively. HPLC-DAD analysis enabled identifying and quantifying 20 compounds, including 13 phenolic acids and 7 flavonoids. Metabolic profiling using UPLC-ESI-MS/MS revealed 67 compounds of different chemical classes: 22 flavonoids, 17 phenolic and organic acids, 8 fatty acids, 3 sterols, 1 terpenoid, 6 amino acids and alkaloids, 5 coumarins, and 2 anthraquinones, 1 sugar, 1 lignin, 1 terpene, and 1 hydrocarbon. Kaempferol-3-O-rhamnoside (Afzelin) (1), fisetin 3-O-rhamnoside (2), and alangilignoside D (3) were isolated and identified from the ethyl acetate fraction using the LC-MS, and H1 & C13 NMR analysis. It is noteworthy that the identified compounds (2), and (3) are the first to be isolated from P. dulce. The extract’s antioxidant activity was assessed using DPPH and ORAC assays, which showed an IC50 of 239.5 ± 8.42 µg/ml and 575.94 ± 11.30 μM TE/equivalent, respectively. The extract achieved a wound closure % of 78.78 after 72 hrs. The cytotoxic activity was assessed against 4 cancer lines A-549, Saos-2, HeLa, and MCF-7 where it showed significant cytotoxic activity against the HeLa cell line with an IC50 value of 2.05 µg/mL using cisplatin as a reference drug. P. dulce leaves' methanolic extract was investigated for its potential use in treating and preventing Alzheimer's disease in vitro, in vivo, and in silico studies. The result demonstrated that the extract inhibited 77% of the acetylcholinesterase (AChE) activity in vitro, and the IC50 value was 19.23 ± 1.02 µg/ml. The in vivo study of scopolamine-induced Alzheimer's confirmed the result by significantly inhibiting AChE, dopamine, noradrenaline, and malondialdehyde, levels and increasing the acetylcholine, and glutathione levels. The in silico study showed that pentahydroxy-tri-methoxy flavone had the strongest binding affinity for AChE (-18.8 kcal/mol). Different computational modeling methos were employed, including principal component analysis, ligand-residue interaction, dynamics cross-correlation matrices analysis, and thermodynamics calculation. The binding of the pentahydroxy-tri-methoxy flavone to the AChE protein decreased the fluctuation and influenced the ligand optimum orientation on the AChE protein conformational space. Additionally, the drug binding energy of AChE and the residue correlation in the pentahydroxy-tri-methoxy flavone-AChE system was increased; تنتمي العائلة البقولية (Leguminosae)، والمعروفة أيضًا باسم عائلة البازلاء، أو الفاصوليا، إلى واحدة من أكبر عائلات النباتات المزهرة، حيث تحتوي على حوالي 12000 نوع موزعة على أكثر من 600 جنس. و عادةً ما تُقسَّم هذه العائلة إلى ثلاث أسر هي: أسرة الفولاويات (Papilionoideae)، وأسرة الميموزاوات ((Mimosoideae، و أسرة السيزالبيناوات .(Caesalpinioideae) ويُعتبر جنس Pithecellobium واحدًا من الأجناس التي تنتمي إلى أسرة السيزالبيناوات، ويشتمل على 100 إلى 200 نوع موزعة في المناطق الاستوائية، خاصةً في أمريكا وآسيا. بيثوسيلوبيام دولسي (اللوز الهندي) هي شجرة دائمة الخضرة واسعة الانتشار. يُعد هذا النوع هو الوحيد من جنس Pithecellobium الذي انتشر خارج موطنه الأصلي. يشير اسم النوع اللاتيني "dulce" إلى اللب الحلو القابل للأكل، بينما يُشتق اسم الجنس من كلمتي "Pithekos" (قرد) و"Lobos" (جراب). يُستخدم اللوز الهندي في الطب الشعبي لعلاج اضطرابات مختلفة مثل قرح الفم والقرحة الهضمية، داء السكري، اضطرابات المرارة، الإسهال والزحار، كما يستخدم لتخفيف ألم الأسنان والأذن، وكعامل مضاد للالتهابات. تهدف هذه الدراسة الى: • التحقيق في المكونات الفيتوكيميائية لمستخلص أوراق نبات اللوز الهندي عبر: 1. المسح الكيميائي للكشف عن الفئات الفيتوكيميائية المختلفة. 2. التحليل الكمي لمجموع الفينولات، الفلافونويدات، و العفصيات. 3. تحديد الفينوليات باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الكفاءة المقترن بكاشف ثنائي الأقطاب. 4. دراسة نواتج الايض الثانوية باستخدام كروماتوجرافيا السائل عالى الكفاءة المقترن بمطياف الكتلة. 5. عزل المركبات باستخدام كروماتوغرافيا العمود و التعرف عليها باستخدام تقنيات مطياف الكتلة والرنين النووي المغناطيسي للبروتون والكربون. • التقييم البيولوجي لإمكانية النشاط المضاد للأكسدة، والتئام الجروح، والسُمية الخلوية، والنشاط المضاد لمرض الزهايمر باستخدام دراسات في المختبر، في الجسم الحي، ودراسات النمذجة و محاكاة الحاسوب. الجزء الأول: الدراسات العقاقيرية • الفصل الأول: المسح الكيميائى لمستخلص الميثانول لأوراق نبات بيثوسيلوبيام دولسي (اللوز الهندي) أكدت الفحوصات الفيتوكيميائية للمستخلصوجود الفلافونويدات، القلويات، الأنثراكينونات، التربينات، الستيرولات، العفصيات، الصابونينات، الكربوهيدرات، والسكريات المختزلة مع غياب جليكوسيدات القلب. • الفصل الثانى: التقدير الكمى للمحتوى الكلي الفينولى و الفلافونويدى و العفصيات تم استخدام طريقة الفولين الطيفية و منحنى قياس حمض الجاليك فى تقدير المحتوى الفينولى لأوراق نبات بيثوسيلوبيام دولسي (اللوز الهندي)، واستخدم كاشف ثلاثى كلوريد الألمونيوم و منحنى قياس فلافونويد الروتن فى تقدير المحتوى االفلافونويدى، بينما استخدمت طريقة الفانلين - حمص الهيدروكلوريك و منحنى قياس الكاتشين فى تقدير المحتوى الكلي للعفصيات. حيث أظهرت التقديرات الكمية لمستخلص الميثانول ان المحتوى الفينولى والفلافونويدي والعفصيات كان 51.44 مليجرام مكافئ لحمض الجاليك / جرام من الوزن الجاف للنبات و 49.48 مليجرام مكافئ للروتن/ جرام من الوزن الجاف للنبات و 145.5 مليجرام مكافئ للكاتشين/ جرام من الوزن الجاف للنبات على التوالي. • الفصل الثالث: دراسة نواتج الايض الثانوية من المركبات الفينولية باستخدام كروماتوجرافيا السائل عالى الكفاءة المقترن بكاشف ثنائي الأقطار مكنت دراسة نواتج الايض الثانوية من المركبات الفينولية باستخدام كروماتوجرافيا السائل عالى الكفاءة لاوراق النبات من التعرف وتحديد كمية 20 مركبًا (13 حمض فينولي و7 فلافونويدات). حيث كان حمض الجاليك متبوعاً بحمض الفيريولك من اعلى الاحماض الفينولية تركيزاً، بينما كان الكامبفيرول متبوعا بالأبيجنين اعلى الفلافونويدات تركيزاً. • الفصل الرابع: دراسة نواتج الايض الثانوية باستخدام كروماتوجرافيا السائل عالى الكفاءة المقترن بمطياف الكتلة تمت دراسة المستخلص الميثانولي للنبات بواسطة تقنية كروماتوجرافيا السائل عالى الكفاءة المقترن بمطياف الكتلة في النمطين السالب والموجب. حيث تم التعرف من خلاله على 67مركب من فئات كيميائية مختلفة تضمنت 22 من الفلافونويد، 17 حمض فينولي وعضوي، 8 أحماض دهنية، 3 ستيرولات، 1 تربينويد، 6 أحماض أمينية وقلويات، 5 كومارينات، و2 أنثراكينونات. • الفصل الخامس: استخلاص وتجزئة و فصل مركبات من مستخلص الاوراق لنبات بيثوسيلوبيام دولسي (اللوز الهندي) تمت تجزئة المستخلص الميثانولي لاوراق النبات الى عدد من المستخلصات الفرعية باستخدام سوائل عضوية متتابعة القطبية (الهكسان, كلوريد الميثيلين, خلات الايثيلي و اخيرا الماء). وتم فصل والتعرف على ثلاث مركبات من جزء الخلات الإيثيلي باستخدام طرق التحليل الكيميائية و التجارب الطيفية المختلفة مثل جهاز مطياف الكتلة و الرنين النووي المغناطيسي البروتوني والكربوني وبالمقارنة بالدراسات المنشورة سابقا وكانت المركبات كالاتي (1) كايمبفيرول-3-أو-رهمنوسيد (أفزلين)، (2) فيسيتين 3-أو-رهمنوسيد، و(3) ألانجيلينوسايد د . ومن الجدير بالذكر أن المركبات المعرفة (2) و(3) تم فصلها لأول مرة من نبات اللوز الهندي. الجزء الثاني: الدراسات البيولوجية • الفصل الأول: دراسة التأثير المضاد للأكسدة في المختبر تم دراسة النشاط المضاد للأكسدة باستخدام DPPHحيث كان تركيز المادة الموافق للتثبيط النصفي (IC50) بقيمة 239.5 ± 8.42 مكغ/مل، بينما اظهرت الطريقة الاخرىORAC تركيز 575.94 ± 11.30 ميكرومول مكافئ للترولوكس (Trolox). • الفصل الثانى: دراسة التأثير على التئام الجروح في المختبر تم إجراء نشاط التئام الجروح باستخدام اختبار جرح الخدش في المختبر على مستخلص الميثانول للأوراق، مما أدى إلى نسبة إغلاق جرح بلغت 78.78 بعد مضي 72 ساعة. • الفصل الثالث :دراسة التأثير المضاد للسرطانات في المختبر تم فحص النشاط السام للخلايا السرطانية لمستخلص الميثانول لأوراق نبات بيثوسيلوبيام دولسي (اللوز الهندي) ضد 4 انواع من الخلايا السرطانية البشرية وهي سرطان الرئة ((A-549 وسرطان العظام Saos-2) و سرطان عنق الرحم (HeLa)، و سرطان الثدي )7MCF-) بالاضافة الى نوع واحد من الخلايا البشرية السليمة (WI-38)باستخدام اختبار MTT وعقار سيسبلاتين (cisplatin) كدواء مرجعي.، حيث أظهرالمستخلص نشاطًا سامًا ملحوظاً ضد خلايا عنق الرحم السرطانية مع قيمة IC50 بلغت 2.05 مكغ/مل و نسبة بقاء 14.65 ± 0.03. • الفصل الرابع: دراسة التأثير المضاد لإنزيم الأستيل كولين إستراز (AChE) في المختبر تم تقييم النشاط المضاد للإنزيم الكولينستراز (AChE) باستخدام اختبار إليمان اللوني في المختبر ودواء دونيبيزيل ((donepezil كمعيار. أظهرت النتائج أن المستخلص منع 77% من نشاط إنزيم الأستيل كولين إستراز (AChE)، وكانت قيمة IC50 هي 19.23 ± 1.02 مكغ/مل. • الفصل الخامس: دراسة التأثير المضاد للزهايمر على فئران التجارب أظهرت حسابات دراسة الجرعة التى تقتل 50% من الفئران (نسبة السمية الحادة) لمستخلص الميثانول للأوراق أن الجرعات 1000 و2000 و3000 ملغم/كغم لم تسفر عن أي نسبة وفيات، وبالتالي كانت الجرعات المستخدمة لإجراء الدراسة في الجسم الحي للفئران أقل من 1/10 من الجرعة السامة. أظهر مستخلص الميثانول للأوراق تأثيرات حماية عصبية ضد مرض الزهايمر من خلال زيادة الفرق في اختبار تمييز الجسم الجديد (NOR) بطريقة تعتمد على التركيز .بالإضافة إلى التثبيط الملحوظ لنشاط إنزيم الأستيل كولين إستراز (AChE)، والدوبامين، والنورأدرينالين، ومعامل الإجهاد التأكسدي المالونديالدهيد، ومعاملات الالتهاب عامل نخر الورم – ألفا (INF-α)، و إنترلوكين-1 بيتا (IL-1β). كما زاد من محتوى الأستيل كولين ومستوى الجلوتاثيون المضاد للأكسدة. الجزء الثالث: دراسات النمذجة و محاكاة الحاسوب • دراسة نمذجة و محاكاة الحاسوب على انزيم الأستيل كولين إستراز (AChE) أظهرت محاكاة الربط الجزيئي أن مركب البنتاهيدروكسي-تري-ميثوكسي فلافون كان له أقوى ارتباط بإنزيم الأستيل كولين إستراز (AChE)(-18.8 كيلو كالوري/ مول) وشكل التكوين الأكثر استقرارًا بين جميع المركبات المختبرة. أظهرت طرق النمذجة الحاسوبية المختلفة، بما في ذلك تحليل المكونات الرئيسية، تفاعل الليغاند مع الرواسب، تحليل المصفوفات التبادلية الديناميكية، وحساب الديناميكا الحرارية، أن ارتباط مركب البنتاهيدروكسي-تري-ميثوكسي فلافون ببروتين AChE يقلل من التذبذب ويؤثر على التوجه الأمثل للليغاند في مساحة تكوين البروتين ER -