TY - BOOK AU - Heba Magdy Abd ElMawgod, AU - Zoba Hassan Ali AU - Amira Elham Fares AU - Nermeen AbuBakr TI - Molecular assessment of mirna-135 and col1a1 and their reflection on histo-morphological changes in dentigerous cyst and odontogenic keratocyst in comparison to dental follicle ; : in-vitro study U1 - 617.6 PY - 2025/// KW - Oral Biology KW - بيولوجيا الفم KW - cell proliferation KW - collagen KW - dental SAC KW - Dentigerous Cyst KW - microRNA KW - Odontogenic Cyst N1 - Thesis (M.Sc)-Cairo University, 2025; Bibliography: pages 162-170.; Issues also as CD N2 - Aim: Osteogenic cysts present a significant diagnostic and therapeutic challenge due to their enigmatic etiologies. The dentigerous cyst (DC) and the odontogenic keratocyst (OKC) are two significant entities, particularly given their uncertain origins. However, evidence suggests that both arise from aberrant growth and differentiation of odontogenic epithelium of dental follicle (DF) consequent to genetic alterations. Thus, this study aimed to evaluate the influence of microRNA- 135 (miRNA-135) and collagen type I alpha 1 (COL1A1) on the histological modifications within DC and OKC, with a focus on comparative analysis against DF. Methodology: Formalin-fixed paraffin-embedded tissues of DF, DC and OKC were subjected to hematoxylin and eosin (H&E) staining, followed by Picrosirus red stain to investigate collagen. Subsequently, Proliferation rate was evaluated by immunohistochemical staining with proliferating cell nuclear antigen (PCNA). This was followed by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) to assess miRNA-135 and COL1A1 expression and western blot analysis to assess COL1A1 and osteocalcin proteins. Results: Histopathological findings were confirmed by PCNA stain showing the highest cell proliferation rate in OKC followed by DC then DF. This was consistent with Picrosirus red stain demonstrating the highest collagen production in OKC followed by DC then DF denoting increased growth and progression. PCR analysis for miRNA-135 and COL1A1 signified their gene upregulation in OKC, followed by DC, then DF, which is in line with increased osteocalcin and COL1A1 proteins. Conclusion: miRNA-135 and COL1A1 gene regulation could indeed represent a promising avenue for therapeutic intervention and prevention of cystic lesion development; الخلفية: تطور الأسنان الطبيعي )تكوين الأسنان( هو عملية معقدة ومنظمة بدقة، تبدأ في المراحل الجنينية. يمكن أن تؤدي الاضطرابات في هذه العملية، سواء كانت وراثية أو بيئية أو تآزرية، إلى تشوهات نمو مختلفة. يُفترض أن الاضطرابات المبكرة في مرحلة الجرس تساهم في تكوين الكيسات القرنية السنية المنشأ (OKCs)، بينما ترتبط التغيرات اللاحقة في مرحلة الجرس المتأخرة بتطور كيسات الأسنان السنيه .(DCs) كلا الكيسين ينشآن من بقايا الظهارية لتكوين الأسنان، ويشكلان تحديات تشخيصية وعلاجية بسبب سلوكياتهما البيولوجية المتغيرة ومسبباتهما غير المعروفة. يعتبر الكيس السني (DC) الأكثر شيوعاً بين الكيسات النمائية المرتبطة بالأسنان غير البازغة. يُعتقد أنه ينشأ من جريب الأسنان (DF) التي يعد موقعاً حرجاً لنشأة العديد من الكيسات السنية المنشأ. قد يكون تطوره مدفوعاً بضغط سائل من الأوردة الجريبية المسدودة، لكن آليات نموه الدقيقة وأسبابها، خاصة فيما يتعلق بزيادة تكون الكولاجين، لا تزال قيد البحث. في المقابل، الكيس القرني السني المنشأ (OKC)، الذي كان يُعرف سابقاً بورم الكيسة القرنية السنية المنشأ بسبب سلوكه العدواني محلياً ومعدلات تكراره العالية، هو أيضاً آفة نمائية، لكن منشأه الدقيق )سواء من جريب الأسنان أو بقايا الصفيحة السنية( وآليات نموه التسللي ونشاطه الانقسامي العالي أقل وضوحاً. إن معدلات النمو المتباينة وتغيرات الكولاجين الملاحظة بين جريبات الأسنان الطبيعية، والكيسات السنية، والكيسات القرنية السنية المنشأ، بالإضافة إلى المحفزات الدقيقة لتحولها المرضي، تسلط الضوء على الحاجة إلى رؤى جزيئية أعمق في إمراضها المميز. يتزايد الاعتراف بأن مسارات الإشارات المتغيرة وتعبيرات الجينات المختلة داخل الظهارة السنية المنشأ ومكوناتها الميزانشيمية المحيطة تساهم في النمو المرضي للآفات السنية المنشأ. وقد حددت الدراسات الجزيئية الحديثة جينات محورية تنظم معدل النمو وديناميكيات الكولاجين في الجريبة السنية الطبيعية. يمكن أن تؤدي التغيرات في هذه الجينات، التي يرتبط العديد منها بالكولاجين )مثل COL5A2 COL5A1, COL3A1, COL1A2, (COL1A1,، إلى تعطيل مسارات النمو الطبيعية، مما قد يساهم في تكوين الكيس السني والكيس القرني السني المنشأ. على سبيل المثال، يرتبط دور COL1A1 في تعزيز نشاط الخلايا المناعية وتأثيره على أنواع الكولاجين الأول والرابع في جدار الكيس بالخصائص العدوانية التي تميز هذه الآفات عن الجريبات السنية الطبيعية. ونتيجة لذلك، سيؤثر اختلال تنظيم هذين الجينين على مستويات البروتين المقابلة لهما )بروتين COL1A1 وبروتين (osteocalcin، مما يساهم في تطور و نشأة التكيسات السنية . الهدف: هدفت الدراسة الحالية إلى تقييم تأثير جينين محددين، وهما miRNA-135 وCOL1A1 ، على التعديلات النسيجية الملاحظة نوعي الكيسات مقابل الجريبات السنية الطبيعية ، بهدف رئيسي هو توضيح مساهمتهما في المسببات غير الواضحة والسلوكيات البيولوجية المتميزة لكل منهما. المنهجية: جُمعت ثلاثون عينة غير ملتهبة وثُبتت في محلول الفورمالين الملحي بتركيز %10 لمدة 48 ساعة. تألفت المجموعة الأولى )الجريبات السنية( - المجموعة الضابطة - من 10 عينات جريبية سنية بشرية أُخذت من أضراس العقل السفلية المطمورة، ثم ثُبتت بالطريقة نفسها وحُضّرت كقوالب برافين. على النقيض، استُرجعت عينات المجموعة الثانية ) الكيسات السنية( والمجموعة الثالثة )الكيسات القرنية السنية المنشأ( ، بواقع 10 عينات لكل منهما، من القوالب الأرشيفية المتوفرة في قسم أمراض الفم والوجه والفكين بكلية طب الأسنان بجامعة القاهرة. بعد ذلك، حُضّرت مقاطع بسُمك 5 ميكرومتر من جميع القوالب. عُولجت المقاطع بصبغة الهيماتوكسيلين والإيوزين (H&E) لتقييم البنية العامة، تلاها صبغة بيكروسيروس الأحمرred) (Picrosirius لدراسة الكولاجين. لاحقاً، قُيّم معدل التكاثر باستخدام الصبغة المناعية الكيميائية للبروتين النووي للخلايا المتكاثرة.(PCNA) تلا ذلك تحليل قياسات شكلية analysis) (Morphometric لتقييم سُمك الظهارة، النسبة المئوية لمساحة الكولاجين، وعدد الأنوية الإيجابية للـ.PCNA ثم أُجري تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الزمن الحقيقي (qRT-PCR) لتقييم تعبير miRNA-135 وCOL1A1 ، وتحليل ويسترن بلوت لتقييم بروتينات COL1A1 و.osteocalcin النتائج: النتائج النسيجية: المجموعة الأولى )المجموعة الضابطة:( أظهرت عينات الجريبات السنية ظهارة مينا مختزلة (REE) تتكون من طبقة واحدة أو ثلاث طبقات، مع خلايا قاعدية مكعبة وخلايا سطحية مكعبة إلى مسطحة. احتوى النسيج الضام المحيط على أرومات ليفية، أوعية دموية غير محتقنة، وألياف كولاجين دقيقة. المجموعة الثانية: كشفت عينات الكيسات السنية عن بطانة كيسية ظهارية حرشفية طبقية غير متقرنة، تتميز بخلايا قاعدية مكعبة إلى عمودية وخلايا مغزلية مسطحة سطحية. احتوى النسيج الضام الكامن على أرومات ليفية، ألياف كولاجين دقيقة، وأوعية دموية. المجموعة الثالثة: أظهرت عينات الكيسات القرنية السنية المنشأ بطانة كيسية سميكة من ظهارة حرشفية طبقية متقرنة، مع وجود خيوط كيراتين في التجويف وأنوية مبرمجة .تضمنت السمات المميزة خلايا قاعدية عمودية بترتيب سياجي، خلايا مكعبة متوسطة، وخلايا ظهارية مسطحة سطحية. احتوى النسيج الضام المرتبط بالكيسات القرنية السنية المنشأ على العديد من الأرومات الليفية وحزم كولاجين كثيفة ER -