TY - BOOK AU - Alaa Atef Fawzy Hassan, AU - Omneya Mohamed Helmy AU - Marwa Mahmoud Raafat TI - Studying the quorum quenching activities of isolates from the plant microbiome and its effect on Pseudomonas aeruginosa virulence U1 - 616.079 PY - 2025/// KW - Microbiology & Immunology KW - الميكروبيولوجيا والمناعة KW - Endophytes KW - Epiphytes KW - quorum quenching KW - lactonase KW - Pseudomonas aeruginosa KW - biofilm KW - Bacillus cereus KW - بكتيريا داخلية KW - بكتيريا خارجية N1 - Thesis (M.Sc)-Cairo University, 2025; Bibliography: pages 87-128; Issues also as CD N2 - Pseudomonas aeruginosa infections are often challenging to treat due to multiple drug resistance, formation of biofilms and a plethora of virulence factors regulated by quorum sensing (QS). Quorum-quenching (QQ) enzymes, such as N-acyl homoserine lactonases, represent a promising anti-virulence strategy that acts by disrupting this signaling mechanism without exerting selective pressure, leading to the development of resistance. Medicinal plants harbor QQ-active endophytes capable of inhibiting QS-regulated behaviors in pathogens. This study aimed to screen endophyte and epiphyte isolates for lactonase activity and evaluate their potential to inhibit virulence in Pseudomonas aeruginosa. Endophytic and epiphytic bacteria were isolated from medicinal and ornamental plants using standard protocols. All isolates were screened for the presence of the aiiA lactonase gene by PCR. The aiiA-positive isolates were tested for QQ activity using the agar well diffusion method, with Agrobacterium tumefaciens KYC55 as the reporter strain. The anti-virulence activity of cell-free supernatant (CFS) of aiiA-positive isolates was evaluated against Pseudomonas aeruginosa PAO1. The CFSs possessing the highest anti-virulence activity underwent partial purification. The anti-virulence activity of partially purified lactonase (PP-Lactonase) was evaluated against multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates. Molecular identification of the most promising isolate, along with aiiA gene sequencing, was performed. The in vivo anti-virulence effect of the PP-Lactonase was evaluated using the Galleria mellonella infection model. Fifty-two bacterial isolates (42 endophyte and 10 epiphyte) were isolated from ten plants (seven medicinal and three ornamental). The aiiA gene, encoding the lactonase enzyme, was detected in 11 endophytes and one epiphyte isolate, nine of which showed complete degradation (100%) of the QS signal molecule N-Hexanoyl-L-homoserine lactone. The PP-Lactonase of the endophyte Bacillus cereus AL1 isolated from the stem of Thymus vulgaris exhibited significant anti-virulence activity, reducing biofilm formation, swarming motility, and pyocyanin production against Pseudomonas aeruginosa PAO1 and Pseudomonas aeruginosa clinical isolates. Sequence alignment of the Bacillus cereus AL1 lactonase protein revealed close similarity to the homologous lactonase from Bacillus cereus. The QQ activity of the PP-Lactonase of Bacillus cereus AL1 protected against Pseudomonas aeruginosa infections in a Galleria mellonella infection model. In conclusion, this study highlights the potential of Bacillus cereus AL1 lactonase as an effective anti-virulence agent against Pseudomonas aeruginosa without the pressure for resistance development; تُشكّل عدوى الزائفة الزنجارية (Pseudomonas aeruginosa) تحديًا في العلاج نظرًا لتعدد مقاومتها للأدوية، وتكوين الأغشية الحيوية، وكثرة عوامل الضراوة التي يُنظّمها استشعار النصاب .(QS) تُمثّل إنزيمات إخماد النصاب (QQ)، مثل إن-أسيل هوموسيرين لاكتوناز، استراتيجيةً واعدةً لمكافحة الضراوة، إذ تعمل على تعطيل آلية الإشارة هذه دون ممارسة ضغط انتقائي قد يؤدي إلى ظهور مقاومة. وتُعَدّ النباتات الطبية مصدرًا للبكتيريا الداخلية القادرة على تثبيط السلوكيات التي يُنظّمها استشعار النصاب في مسببات الأمراض. هدفت هذه الدراسة إلى عزل البكتيريا الداخلية والخارجية من النباتات الطبية و نباتات الزينة، وفحصها للكشف عن نشاط إنزيم اللاكتوناز، وتقييم قدرتها على تثبيط الضراوة في الزائفة الزنجارية .(Pseudomonas aeruginosa) تم عزل البكتيريا الداخلية والخارجية من النباتات باستخدام بروتوكولات قياسية. جرى فحص جميع العزلات للكشف عن وجود جين aiiA المشفِّر لإنزيم اللاكتوناز بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) وتم اختبار العزلات الإيجابية لجينaiiA لتحديد نشاط تثبيط الإحساس بالجمْع باستخدام طريقة الانتشار في الوسط الآغاري، مع استخدام بكتيريا الأغروباكتيريوم توميفاسيانس (Agrobacterium tumefaciens KYC55) كسلالة كاشفة. بعد ذلك، تم تقييم النشاط المضاد للضراوة للراشح الخالي من الخلايا للعزلات الإيجابية ضد الزائفة الزنجارية PAO1 Pseudomonas aeruginosa . ثم خضعت العزلات الأكثر فعالية لعملية تنقية جزئية للإنزيم. وقد جرى تقييم نشاط الإنزيم المنقّى جزئيًا ضد عزلات الزائفة الزنجارية المقاومة المتعددة للأدوية. كما تم إجراء التعريف الجزيئي للعزلة الأكثر نشاطاً، و كذلك التعريف الجزيئي لتسلسل جينaiiA. كما أُجري تقييم للنشاط المضاد للضراوة للإنزيم المنقّى جزئيًا باستخدام نموذج إصابة يرقات عثّة الشمع الكبير .(Galleria mellonella) تم الحصول على 52 عزلة بكتيرية (42 داخلية و10 خارجية) من عشرة نباتات (سبعة طبية وثلاثة زينة). و تم الكشف عن وجود جين aiiA في 11 عزلة داخلية وعزلة خارجية واحدة، تسعٌ منها أظهرت تحللاً كاملًا (100%) لجزيء الإشارة من نوع N-Hexanoyl-L-homoserine lactone. وقد أظهر الإنزيم المنقّى جزئيًا من العزلة الداخلية العصوية الشمعيةBacillus cereus AL1 المستخلصة من ساق نبات الزعتر (Thymus vulgaris) نشاطًا قويًا مضادًا للضراوة، حيث خفّض من تكوين الأغشية الحيوية، والحركة الانسيابية (Swarming motility) ، وإنتاج البيوسيانين ضد الزائفة الزنجاريةPAO1 Pseudomonas aeruginosa والعزلات السريرية من الزائفة الزنجاريةPAO1 ذات المقاومة المتعددة للمضادت الحيوية. كما أظهرت مقارنة تسلسل بروتين اللاكتوناز الخاص بـ العصوية الشمعية Bacillus cereus AL1 تشابهًا وثيقًا مع الإنزيم المناظر في Bacillus cereus. كما اظهر نشاط إخماد إستشعار النصاب للإنزيم المنقّى جزئيًا حماية فعّالة ضد عدوى الزائفة الزنجارية في نموذج إصابة يرقات عثّة الشمع الكبير ( .(Galleria mellonella في الختام، تُبرز هذه الدراسة إمكانات إنزيم اللاكتوناز من عزلة العصوية الشمعية Bacillus cereus AL1 كعامل واعد مضاد للضراوة ضد الزائفة الزنجارية ، وذلك دون التسبّب في تطور مقاومة دوائية ER -