Thesis (M.Sc)-Cairo University, 2023.

Bibliography: pages 138-151.

Simple protocol of inducing somatic embryos from seedlings derived from Green immature seeds or nodes or cotyledons of “sour orange” and rough Lemon‟ were used as a source of seedling explants. Somatic embryo development is associated with series of molecular events To produce synthetic seed , 1-Seeds disinfection 2-Shootlet production from Seedlings and Micro nodes 3- Callus induction from Micro nodes and seedling 4-Embryonic calli production from juvenile tissue5- Somatic embryogenesis production
6-Regeneration and growth 7-Encapsulation and synthetic seeds formation
8-Synthetic seeds regeneration and growth9- Evaluation artificial seeds .Immature seeds were cultured on MS medium free growth regulators, after seedling formation and divided into three parts (new leaves, stem, roots) and isolated cotyledon were cultured on MS media with 2,4, D at 0.75, 1.0 and 1.25 mg/l. to induce embryo calli. To maintain continuous embryogenesis the embryonic calli were transferred on MS supplemented with kin at 0.1, 0.2 and 0.3 mg/l. The somatic embryos were induced by transfer on MS media containing coconut water at 1, 2 and 3 % for 7 weeks .The encapsulation process was induced by using sodium alginate at 2 and 4 % and gelling by calcium nitrate or calcium cholorid. Germination encapsulation somatic embryos on MS free hormone. Genetic stability of embryos derived plantlets was assessed using ISSR markers as compared to plantlets grown ex vitro. The results indicated that Cotyledon was the best part in vitro culture on MS free hormones for six weeks .MS +2, 4-D at1.0 mg/l was the best media for embryonic calli callus induction.To maintain continuous embryogenesis, by (MS + 0.2 mg/l kintin) for embryogenic calli. The best growth and differentiation of somatic embryos was MS + 2 % coconut water for cotyledons and leaves. Embryo maturation after 1–2 months of development transferred to MS free medium and incubated for at 2 weeks. The suitable encapsulated somatic embryos with Na–Alginate 2% and solidified by CaCl2 at 20% for 30 min. High Genetic stability appeared of regenerated plantlets derived from encapsulated somatic embryos as compared with somatic embyros grown in vitro by using ISSR markers. This protocol is used to propagate of Rough lemon plants for synthetic seeds production from encapsulated somatic embryo. This type of capsules could be useful in exchange of sterile material between laboratories, germplasm conservation and direct plant propagation.

تم استخدام بروتوكول بسيط لتكوين أجنة جسدية من شتلات مشتقة من بذور أو عقد أو فلقات خضراء غير ناضجة من "البرتقال الحامض" و"الليمون الخشن" كمصدر للشتلات المستأصلة. يرتبط تطور الجنين الجسدي بسلسلة من الأحداث الجزيئية لإنتاج البذور الاصطناعية، 1- تطهير البذور 2- إنتاج البراعم من البذور والعقد الدقيقة 3- تكوين الكالس من الأفرع الدقيقة والبذور 4- إنتاج الكالس الجنيني من الأنسجة الجديدة 5- تكوين الجنين الجسدي 6- التجدد والنمو7 -التغليف وتكوين البذور الإصطناعية 8- تجديد ونمو البذور الإصطناعية 9- تقييم البذور الصناعية. وتمت زراعة البذور غير الناضجة على بيئة MS الخالية من منظمات اانمو، وبعد تكوين البادرات تم تقسيمها إلى ثلاثة أجزاء (أوراق جديدة، ساق، جذور) وفلقة معزولة. تمت زراعتها على أوساط + MS 2,4-D عند 0.75 و1.0 و1.25 ملجم/لتر. لتكوين الكالس الجنيني. وللحفاظ على التطور الجنيني المستمر، تم نقل الكالس الجنيني على MS مع إضافة االكينتين 0.1 و 0.2 و 0.3 ملجم / لتر. تم إستحداث الأجنة الجسدية بالنقل على وسط MS يحتوي على ماء جوز الهند بنسبة 1 و 2 و 3 % لمدة 7 أسابيع. وتم تحفيز عملية التغليف باستخدام ألجينات الصوديوم بنسبة 2 و 4 % والتبلور بواسطة نترات الكالسيوم أو كلوريد الكالسيوم. بعد التغليف تم إنبات الأجنة الجسدية على بيئة MS الحرة. تم تقييم الثبات الوراثي للنباتات المشتقة من الأجنة باستخدام تحليل ISSR مقارنة بالاجنة الجسمية . أشارت النتائج إلى أن الفلقات كان أفضل جزء الزرعة المختبرية على بيئة MS لمدة ستة أسابيع. كان أفضل وسيلة لتكوين الكالس الجيني للجنين + MS 2,4-D عند 1.0 ملجم / لتر .للحفاظ على إستمرارية التطور الجنيني بنسبة (MS +0.2 كينتين ملجم/ لتر) للكالس الجنيني. أفضل نمو وتمايز للأجنة الجسدية هو + MS 2% ماء جوز الهند للنبتات والأوراق. يتم نقل الجنين الناضج بعد 1-2 أشهر من التطور إلى وسط خالٍ من منظمات النمو والتحضين لمدة أسبوعين. الأجنة الجسدية المغلفة المناسبة مع اليجينات الصوديوم 2% Na-Alginate ويتم ترسيخها بواسطة كلوريد الكالسيوم CaCl2 بنسبة 20% لمدة 30 دقيقة. ظهر ثبات وراثي عالي للنباتات المتجددة المشتقة من أجنة جسدية مغلفة (البذور الصناعية) مقارنة بالاجنة الخضرية باستخدام تحليل ISSR. يستخدم هذا البروتوكول لنشر والحفاظ على نباتات الليمون الخشن والبرتقال المر لإنتاج البذور الاصطناعية من الجنين الجسدي المغلف. يمكن أن يكون هذا النوع من الكبسولات مفيداً في تبادل النباتات المعقمة بين المختبرات وحفظ الأصول الوراثية والتكاثر المباشر للنباتات.

Issues also as CD.

Text in English and abstract in Arabic & English.